我們知道，在原代細胞培養檢測實(shí)驗在實(shí)驗儀器等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了原代細胞保存這個(gè)實(shí)驗步驟，將暫時(shí)多出來(lái)的原代細胞冰凍保存，保存細胞活力。

原代細胞復蘇是一個(gè)簡(jiǎn)單的試驗操作，但操作中也有許多需要注意的事項，在實(shí)驗操作中注意細小的問(wèn)題，才能使復蘇后的細胞保持良好的狀態(tài)，針對原代細胞復蘇應該注意以下幾點(diǎn)：

1. 可以提前把需要的體積的培養液放到培養瓶里，擰松瓶蓋，放到孵箱里30分鐘--1個(gè)小時(shí)； 

2. 為防止凍存管在升溫時(shí)出現爆裂等情況，可以在放入水浴前就把超凈臺里的蓋子擰松一下然后再擰上；

3. 水浴溫度37℃左右。

一、慢凍程序

1.  標準程序：采用細胞凍存器

當溫度在-25 ℃以上時(shí)，1~2 ℃/min；

當溫度達-25 ℃以下時(shí)，5~10 ℃/min；

當溫度達-100℃時(shí)，可迅速放入液氮中。

2.  簡(jiǎn)易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內，紗布袋系以線(xiàn)繩，通過(guò)線(xiàn)繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2 ℃的速度，在40 min內降至液氮表面過(guò)夜，次日早晨投人液氮中。

3.  傳統程序：冷凍管置于4℃ 10 分鐘→ -20℃ 30 分鐘→ -80℃ 16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽長(cháng)期儲存。

二、低溫保護劑的應用

在細胞凍存時(shí)加入溫保護劑，能大大提高凍存效果。

常用的低溫保護劑是DMSO，它是一種滲透性保護劑，可迅速透入細胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點(diǎn)，延緩凍結過(guò)程，能使細胞內水分在凍結前透出細胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內冰晶，從而減少冰晶對細胞的損傷。

三、保存細胞的復蘇方法

1.  快速解凍

凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1 分鐘內全部融化（不要超過(guò)3 分鐘）。

2.  解凍后的細胞可直接接種到生長(cháng)培養液的細胞培養瓶中直接進(jìn)行培養，24小時(shí)后再用新鮮培養液替換舊培養液，以去除DMSO。

3.  如果細胞對冷凍保護劑特別敏感

解凍后的原代細胞應先通過(guò)離心去除冷凍保護劑，然后再接種到生長(cháng)培養液的培養瓶中。

上海研域生物應保證清潔，整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標板不接觸次氯酸，并可以使實(shí)驗中用到的“花板"降至限度。從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實(shí)驗結果。